尊龙凯时的稀释法用于测定最小抑菌浓度（MIC）是一种评估抗菌剂抑制微生物生长能力的实验技术。此方法包括两种主要形式：微量稀释法和肉汤稀释法。琼脂稀释法因其操作简便、成本低廉及适合高通量筛选而受到广泛应用，尤其适合自动化操作和药物浓度的精确控制。而肉汤稀释法则更为直观、易于操作，适合实验室规模的测试，并可以根据实验需求灵活调整药物浓度和培养基体积。

琼脂稀释法

1. 原理：本实验采用琼脂稀释法，将不同浓度的抑菌剂溶解在琼脂培养基中，然后点种细菌。通过观察细菌的生长情况，确定抗（抑）菌物质抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）。该方法适用于不溶性抗（抑）菌产品。

2. 操作步骤：

• （1）抗（抑）菌溶液的配制：在进行无菌操作时，取5ml或5g样品（固体研磨后），放入45ml灭菌磷酸缓冲液中，充分震荡以配制成10%的均匀分散溶液或悬液。
• （2）含抗菌剂培养基的配制：将10%的抗（抑）菌溶液用PBS按倍数稀释成不同浓度的受试液，置于45℃～50℃水浴中备用。
• （3）双倍浓度培养基配制：称取76g MH琼脂培养基，溶解于1000ml水中，加热至沸腾并溶解，随后在121℃下压力蒸汽灭菌15分钟，放置在45℃～50℃水浴中备用。
• （4）含抗（抑）菌液的培养基配制：分别取10ml系列稀释的抗菌液和10ml双倍MH琼脂培养基，摇晃均匀待凝固后备用。
• （5）接种：使用加样器取1μl～2μl菌悬液点种于培养基平皿中，确保神的菌量约为107 cfu/ml。
• （6）阳性对照：以同样方法接种不含抗（抑）菌成分的MH琼脂平板。
• （7）培养观察：将接种后的平板放置于35℃培养箱中倒置培养18h～24h，观察结果。

3. 评判标准：根据菌落生长是否受到完全抑制来评定最低抗（抑）菌液浓度，即为该样品对受试菌的MIC。

肉汤稀释法

1. 原理：本实验将不同浓度的抑菌剂溶解于营养肉汤培养基中，接种细菌，通过观察细菌的生长情况来确定抗（抑）菌剂抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）。该方法适用于可溶性抑菌产品。

2. 操作步骤：

• （1）制备菌悬液，采用2112所示的方法制备金黄色葡萄球菌和大肠杆菌悬液。
• （2）含抗菌剂的培养基配制：用蒸馏水将抗（抑）菌溶液对倍系列稀释，取各稀释度受试液25ml加入到含25ml双倍浓度营养肉汤的试管中。
• （3）接种：取0.1ml菌悬液（含菌量约为108 cfu/ml）接种于含抗（抑）菌剂的营养肉汤试管中，作为实验组样本。
• （4）阳性对照组样本接种：同样方法接种不含抗（抑）菌剂的营养肉汤试管中。
• （5）阴性对照组样本：取2支含营养肉汤的试管作为阴性对照。
• （6）培养观察：将各组样本放置于37℃培养箱中培养48小时，观察结果。
• （7）活菌培养计数：试验中需计数试验用菌悬液，其作用浓度应为5×10^5 cfu/ml～5×10^6 cfu/ml。

3. 评判标准：阳性对照组应出现细菌生长（混浊），阴性对照组应无细菌生长（透明），当试验用菌悬液的浓度在5×10^5 cfu/ml～5×10^6 cfu/ml时，试验组无菌生长的最高稀释度对应的抗（抑）菌剂浓度即为该样品对受试菌的MIC。

通过采用尊龙凯时的稀释法，可以有效评估抗菌剂的应用潜力，推动生物医疗研究的进步。